摘 要：目的：探索相關炎癥因子及血管內皮生長因子（VEGF）表達在痔瘡中的作用及其可能的分子機制。方法：選取本院2020年6—12月肛腸科收治的30例住院痔瘡患者為研究對象，采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法檢測術前痔組織標本與術前及術后第3 d、第7 d血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-10(IL-10)、高遷移率族蛋白B1(HMGB1)、VEGF含量。結果：術前血清和痔組織中TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF的表達比較，差異無統計學意義（P>0.05）；術前血清TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF的表達均高于術后第3 d、第7 d，組間比較，差異具有統計學意義（P<0.05）；術后第3 d血清中TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF表達均高于術后第7 d，組間比較，差異具有統計學意義（P<0.05）。結論：痔瘡患者術前的TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF表達高于術后，提示TNF-α、IL-10、HMGB1炎癥因子及VEGF表達可能參與了痔瘡的形成。
關鍵詞：痔瘡; 腫瘤壞死因子-a;白細胞介素-10;高遷移率族蛋白B1;血管內皮細胞生長因子;
痔瘡在肛腸疾病中最為常見，可以發生在任何年齡，但隨著年齡增長，其發病率逐漸升高[1]。我國幾項人口疾病調查研究報告顯示，約59.3%的患者患有肛腸疾病，其中86.75%患者患有痔瘡[2,3]。根據國際調查研究報告可以發現，痔病的臨床發病率為63%～70%,20歲以前很少出現痔瘡，30歲以上人群的痔瘡發病率上升，30歲以上患者的發病率為68%，通常45～65歲人群為痔瘡的高發人群[4]。根據2020年中國中西醫結合學會大腸肛門病專業委員會制定的《中國痔病診療指南》，痔瘡按發病部位可以分為內痔、外痔及混合痔三種，根據痔的脫垂程度可將內痔分為4度，而混合痔是內痔和相應部位外痔相互融合成的一個整體，主要臨床表現是內痔和外痔的癥狀都有[5]。在臨床實踐中我們發現，對于Ⅰ度痔瘡和輕Ⅱ度痔瘡，一般可通過飲食調整、口服靜脈活性藥物、中草藥聯合局部外用藥物（栓劑、洗劑、膏劑）等保守方法治療，其臨床療效十分顯著；但是對重Ⅱ度及Ⅲ～Ⅳ度痔瘡患者采用保守治療效果較差，癥狀無法消除，患者的日常生活會受到嚴重影響，最后只能選擇外科手術治療，然而手術治療痔瘡后往往會導致膿腫等并發癥，影響患者的治療效果[6]。因此，探索痔瘡發病的分子機制對臨床痔瘡治療和預防具有重要的現實意義。本項目通過前瞻性收集痔瘡患者的臨床資料，探索相關炎癥反應及VEGF表達在痔瘡中的作用及其可能的分子機制。
1 資料與方法
1.1 主要儀器和試劑
主要儀器：酶標儀，美國伯樂公司；高精度微量移液器及槍頭，0.5～10μL、2～20μL、20～200μL、200～1000μL;DHG-9091A干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司；手術剪、1.5 m L離心管、紗布；高速組織研磨儀，上海凈信實業發展有限公司，型號：Tiss-24；分析電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司，ISO9001；低溫高速離心機；渦旋震蕩儀。
實驗試劑（均采用上海江萊生物科技有限公司的試劑）：人白細胞介素-10(IL-10）酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測試劑盒（JL19246）；人腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒（JL10208）；人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA檢測試劑盒（JL13693）；人血管內皮細胞生長因子（VEGF)ELISA檢測試劑盒（JL18341）。
1.2 一般資料
選取本院2020年6—12月肛腸科收治的30例住院痔瘡患者為研究對象，所有患者均符合《中國痔病診療指南》的相關臨床診斷標準。
納入標準：(1)符合上述指南的診斷標準。(2)患者痔瘡急性發作以疼痛、水腫、便鮮紅色血、黏膜改變為主要臨床表現。(3)發病年齡為20～60歲。(4)肛門既往無手術病史。術前肛門形態及功能正常者。(5)無明顯手術禁忌證。(6)治療依從性較好。(7)臨床資料完整。(8)所有患者均自愿簽署手術同意書。
排除標準：(1)不符合上述指南的診斷標準，無疼痛、水腫、便鮮紅色血、黏膜改變甚至局部感染的急性發作期患者。(2)同性戀患者。(3)妊娠及哺乳期婦女。(4)精神異常的患者。(5)伴有全身性疾病的患者，如嚴重的冠心病、嚴重的糖尿病、嚴重的血液系統等原發性疾病。(6)克羅恩病、潰瘍性結腸炎、腸結核、晚期肛管直腸癌患者。(7)人類免疫缺陷病毒、梅毒等傳染病患者。(8)參加其他臨床研究的患者。(9)未堅持完成一療程者。
1.3 標本采集
血清標本采集：分別采集患者術前1 d和術后3 d、7 d外周靜脈血標本5 m L,3 000 r/min離心15 min后，EP管封裝，置于-80℃冰箱保存待檢。痔組織標本采集：患者均做好血常規、糞便常規、尿常規、肝功能、腎功能、血糖、凝血功能、人類免疫缺陷病毒、梅毒、丙型肝炎病毒、乙肝兩對半、常規心電圖、肺部CT等相關術前檢查。詳細告知患者及其家屬病情及手術方案，同時簽署手術同意書；術前禁食、禁飲10 h；術前備皮，開塞露灌腸做好腸道準備。患者均在腰硬聯合麻醉下行選擇性痔上黏膜切除釘合術（TST術），采集痔瘡組織標本，大小約0.4 cm×0.8 cm，置于液氮罐中，于-80℃冰箱保存待檢。
1.4 方法
采用ELISA法檢測血清和痔組織標本中TNF-α、IL-10、HMGB1、VEGF含量，具體檢測方法嚴格按照免疫試劑盒說明書執行，根據標準曲線的回歸方程，計算出血清和痔組織標本中TNF-α、IL-10、HMGB1、VEGF含量。
1.5 觀察指標
患者依據臨床評估，給予手術切除治療，分別于術后第3 d、第7 d對患者的臨床癥狀進行觀察及評分。顯效的患者積分下降≥75%，有效的患者積分下降40%～75%，無效患者積分≤40%。患者痔瘡急性發作期的臨床癥狀評分標準具體如下：(1)疼痛。無（0分）；輕微疼痛或間歇性疼痛，可以耐受的疼痛（1分）；難以忍受需要口服止痛藥治療（2分）；需要口服止痛藥治療、無法睡眠休息（3分）。(2)便血。無（0分）；染紙帶血（1分）；滴血（2分）；噴血（3分）。(3)水腫。無（0分）；<1cm2(1分）；1～2cm2(2分）；>2cm2(3分）。(4)黏膜改變。無（0分）；充血（1分）；充血、輕度糜爛（2分）；重度糜爛（3分）。
1.6 統計學方法
采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以表示，采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗。三組以上樣本均數的比較采用單因素方差分析。P<0.05為差異具有統計學意義。
2 結果
2.1 臨床療效
術后第3 d對患者癥狀進行觀察評分，有效率達90.0%，術后第7 d有效率達100.0%，見表1。
表1 臨床療效[n(%)]
2.2 炎癥因子及VEGF的表達
術前血清與痔組織中TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF表達比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表2。術前血清炎癥因子及VEGF的表達均高于術后第3 d、7 d，組間比較，差異具有統計學意義（P<0.05）；術后第3 d血清中TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF均高于術后第7 d，組間比較，差異具有統計學意義（P<0.05），見表3。
表2 術前血清及痔組織炎癥因子及VEGF的表達水平比較?s,pg/m L)
表3 術前、術后第3?d、術后第7?d血清炎癥因子及VEGF的?表達水平比較
注：與術前比較，(1)P<0.05；與術后第3 d比較，(2)P<0.05。
3 討論
痔瘡屬于一種慢性疾病，形成周期較長，其發病機制至今仍不完全清楚，有肛墊下移學說、靜脈曲張學說、細菌感染學說、便秘學說等[7,8]。現代醫學認為痔瘡的發病機制十分復雜，特別是痔瘡的急性發作期，患者疼痛不適、便血，嚴重影響患者的生活質量。本研究對術后第3 d患者癥狀進行觀察評分，有效率達90.0%，到了術后第7 d有效率達100.0%，可以發現對于痔瘡急性發作的患者行手術治療，可以最大限度縮短病程，減輕患者痛苦，達到快速康復的目的。術前血清及痔組織炎癥因子及VEGF的表達水平比較無明顯差異性，說明術前血清和痔組織中TNF-α、IL-10、HMGB1、VEGF的含量是一樣的；而術前血清中TNF-α、IL-10、HMGB1含量較術后第3 d、第7 d均更高，說明混合痔術后可降低炎性因子水平，提示TNF-α、IL-10、HMGB1等炎癥相關因子在痔瘡發病中發揮重要作用。VEGF是血管內皮細胞特異性的肝素結合生長因子，可在體內誘導血管新生。該因子可促進血管內皮細胞分裂、延長血管內皮細胞壽命，同時增加毛細血管通透性，為血管內皮的遷移及血管形成提供物質基礎，能有效地促進血管再生，在血管形成中發揮著重要作用。由于直腸上靜脈屬于門靜脈系統，因其無靜脈瓣，使血液不易回流，加上直腸上、下靜脈叢管壁薄，位置淺，易出現血液淤積。本研究發現術前VEGF表達水平高于術后第3 d、第7 d，說明VEGF在血管生成生長中具有重要作用，VEGF可能是促進痔瘡血管增殖的重要因素。通過本研究可以發現，TNF-α、IL-10、HMGB1等相關炎癥因子及VEGF表達可能參與了痔瘡的形成，也為痔瘡預后預測及新型治療藥物的研發提供了一種新的方向。
參考文獻
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文章名稱：相關炎癥因子及VEGF表達在痔瘡中的作用研究
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